Полиморфизм NAT2^{Lys268Arg(A803G)} и общий IgE в прогнозе клинического течения коинфекции ВИЧ-туберкулёз

Введение

Полиморфизм гена NAT2 может быть вовлечён в патогенез заболеваний, сопровождающихся ростом уровня IgE. Показано, что риск развития IgE-опосредованных атопических заболеваний в 3 раза выше у медленных ацетиляторов, чем у быстрых, причём гомозиготы по дикому аллелю не выявляются в группах с тяжёлыми формами атопии [1]. Развитие ВИЧ-инфекции также сопровождается существенным увеличением содержания общего IgE в сыворотке крови, которое ассоциируется с плохим прогнозом заболевания – переходом в стадию вторичных заболеваний и летальным исходом [2].

Цель

Целью настоящей работы явилось исследование роли полиморфного локуса NAT2Lys268Arg(A803G) и общего IgE в прогнозе клинического течения коинфекции ВИЧ–туберкулёз (ВИЧ/ТБ).

Материалы и методы

В исследование включены 110 больных коинфекцией ВИЧ/ТБ – 68 (62 %)мужчин и 42 (38 %) женщины, в возрасте от 24 до 58 (36,9±0,6) лет, находившихся на стационарном лечении в ГКУЗ Кемеровской области «Новокузнецком клиническом противотуберкулёзном диспансере» (Новокузнецк) в период 2017–2019 гг. Критериями включения в исследование были: установленный диагноз коинфекции ВИЧ/ТБ, проведение противотуберкулёзной терапии согласно действующим Федеральным клиническим рекомендациям [3], согласие пациентов на участие в исследовании. Гельминтозы не были диагностированы ни у одного больного по результатам рутинного обследования пациентов в противотуберкулёзном учреждении. Смертельные исходы за период 02.02.2018 – 25.09.2019 гг. зарегистрированы у 33 (29,0 %) больных в возрасте от 27 до 54 лет (35,9±1,1 лет). Из них мужчин – 22 (67 %), женщин – 11 (33 %). По результатам аутопсии причиной смерти было про- грессирование ТБ с полиорганным поражением. Сроки жизни больных с момента утверждения диагноза ТБ и взятия на диспансерный фтизиатрический учёт до летального исхода составили от 10 дней до 1,9 лет. Для выделения образцов геномной ДНК и плазмы крови у каждого больного забирали по 3 мл цельной венозной крови из локтевой вены в стандартные пробирки, содержащие ЭДТА-K3 (IMPROVE, China). В момент забора крови на исследование пациенты находились на интенсивной фазе лечения туберкулёза. Выделение плазмы проводили после осаждения клеток центрифугированием при 3 000 об/мин в течение 5 мин, из клеточного осадка выделяли геномную ДНК с помощью коммерческого реагента «ДНК-экспресс-кровь» (НПФ «Литех», Москва). В образцах плазмы крови определяли концентрацию неспецифического (общего) иммуноглобулина Е (IgЕ) (ВЕКТОР БЕСТ, Новосибирск) методом твёрдофазного иммуноферментного анализа. Генотипирование проводили по полиморфному локусу NAT2 Lys268Arg(A803G) rs1208 гена N-ацетилтрансферазы2 с помощью коммер- ческих комплектов реагентов «SNP-экспресс» (НПФ Литех, Москва). Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программ Microsoft Excel, InStatII, SPSS. Обозначения: r – коэффициент корреляции Спирмена, n – количество обследованных пациентов/генотипов/аллелей, Min–Max – разброс данных от минимального до максимального значения, Ме – медиана, р – критический уровень значимости. Распределение частот генотипов локуса NAT2 Lys268Arg(A803G) не отличалось от равновесия Харди–Вайнберга (χ2 = 0,15, р = 0,70).

Результаты

Содержание IgE в плазме крови больных в зависимости от носительства вариантов локуса NAT2Lys268Arg(A803G) и корреляционная связь его уровня с генотипами представлены в таблице. Менее 100 МЕ/мл IgE (нормальное количество, отсутствие атопии) в плазме обнаружено у 14 из 46 (30 %) гомозигот NAT2 Lys268Lys (A803А), у 11 из 49 (22 %) гетерозигот NAT2 Lys268Arg и у 7 из 11 (64 %) мутантных гомозигот NAT2 Arg268Arg(G803G). То есть, для мутантных гомозигот NAT2 Arg268Arg(G803G) с более чем 4-кратной вероятностью (р = 0,0167; OR = 4,9; 1,3–18,2) характерен нормальный уровень общего IgE в крови. Одновременно обнаружена отрицательная корреляционная связь уровня этого иммуноглобулина с носительством мутантного генотипа NAT2Arg268Arg(G 803G) и положительная – с носительством гетерозиготного генотипа NAT2Lys268Arg(A803G).

Таблица

Содержание IgE (МЕ/мл) в плазме крови обследованных больных в зависимости от локуса NAT2Lys268Arg

Уровень IgE положительно коррелировал с летальным исходом (r = 0,268; р = 0,005; n = 106) и отрицательно – с продолжительностью жизни (r = –0,249; р = 0,009; n = 110). У большинства пациентов с ВИЧ/ТБ (у 50 из 77, 65 %, живущих и у 27 из 33, 82 %, умерших) выявлено более 100 МЕ/мл IgE. Тем не менее, в среднем для живущих пациентов в сравнении с умершими было характерно сниженное содержание IgE (соответственно 325,1±40,7 МЕ/мл, Ме = 154,1 МЕ/мл, n = 77, против 494,1±63,2 МЕ/мл, Ме = 437,7 МЕ/мл, n = 33, р = 0,014).

Срок жизни 33 из 34 обследованных умерших пациентов с момента утверждения диагноза ТБ варьировал от 38 до 690 дней (289,6±32,2 дней, n = 33). Среди умерших оказался всего лишь один носитель мутантного варианта NAT2 Arg268Arg(G803G), который прожил более половины среднего срока жизни – 182 дня. В его крови было определено всего 19,7 МЕ/мл IgE. Таким образом, с одной стороны, для носителей мутантного генотипа NAT2Arg268Arg(G803G) характерно сниженное количество IgE в циркуляции, а с другой – уровень иммуноглобулина отрицательно коррелирует с продолжительностью жизни.

Заключение

Нормальный уровень IgE при носительстве мутантного варианта NAT2 Arg268Arg(G803G) может быть благоприятным фактором для прогноза клинического течения коинфекции ВИЧ/ТБ. Для исследования роли полиморфизма гена NAT2 в патогенезе коинфекции ВИЧ–туберкулёз необходим анализ ассоциаций его гаплотипических сочетаний, формирующих различные фенотипы ацетилирования, с клиническими параметрами заболевания.

Литература

1. Gawronska-Szklarz B, Pawlik A, Czaja-Bulsa G, et al. Genotype of N-acetyltransferase 2 (NAT2) polymorphism in children with immunoglobulin E-mediated food allergy. Clin. Pharmacol. Ther. 2001:69(5);372–378. DOI: 10.1067/mcp.2001.115541
2. Israeёl-biet D, Labrousse F, Tourani J-M, et al. Elevation of IgE in HIV-infected subjects: a marker of poor prognosis. Allergy Сlin. Immunol. 1992:89;68–75. DOI: 10.1016/s0091-6749(05)80042-9
3. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией / Васильева И.А., Покров- ский В.В., Аксенова В.А. и др., 2015 г. [Federal’nye klinicheskie rekomendacii po diagnostike i lecheniyu tuberkuleza u bol’nyh VICH-infekciej. Vasileva IA, Pokrovskii VV, Aksenova VA, et al. 2015. (In Russ).]