Полиморфизм CRPC3872T и IgA при разных исходах лечения коинфекции ВИЧ/туберкулёз у госпитализированных пациентов с множественной лекарственной устойчивостью или лекарственной чувствительностью Mycobacterium tuberculosis

Введение

До настоящего времени лица, живущие с ВИЧ, госпитализированные с впервые выявленным туберкулёзом (ТБ), подвергаются высокому риску смерти даже после начала антиретровирусной и стандартной противотуберкулёзной терапии (АРТ и ПТТ). Высокая смертность при коинфекции ВИЧ/ТБ частично объясняется развитием у пациентов ТБ с лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis (МБТ): летальность у больных монорезистентным ТБ может составлять 19 %, у больных с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) МБТ — 18 %, у пациентов с пре-ШЛУ или ШЛУ МБТ — 39 %. У пациентов с лекарственной чувствительностью микобактерий (ЛЧ МБТ) смертность связана с недостаточностью либо избыточностью фармакотерапии, колеблясь от 6 до 32 % [1]. Исход лечения зависит не только от чувствительности либо резистентности инфектанта к фармпрепаратам, но и от иммунного статуса больного, который включает эффективность врождённого (NK-клетки), адаптивного, клеточно-опосредованного (CD4- и CD8-клетки) и гуморального (В-клетки и антитела) иммунитета, а также генетические детерминанты [2]. Иммуноглобулины класса А, обеспечивающие локальный иммунитет слизистых оболочек, в лёгких выполняют антибактериальную роль по отношению к микобактериям туберкулёза, осуществляя их клиренс [3]. При ответе на инфекцию сывороточные биомаркеры гуморальной иммунной системы, в том числе IgA, тесно взаимодействуют с биомаркерами воспаления, в том числе С-реактивным белком. Его активность зависит от носительства варианта полиморфного генного локуса rs1205 CRPC>T, минорный аллель которого, по некоторым данным [4], ассоциируется с низким уровнем С-реактивного белка в плазме.

Цель

Исследовать связь полиморфизма rs1205 CRP^C>T (СRPC^3872T) и иммуноглобулинов класса А с исходом лечения госпитализированных пациентов с ВИЧ/ТБ и МЛУ МБТ или ЛЧ МБТ.

Материалы и методы

В исследование включены больные коинфекцией ВИЧ/ТБ в возрасте от 24 до 54 лет, находившиеся на стационарном лечении в ГБУЗ «Новокузнецкий клинический противотуберкулёзный диспансер» г. Новокузнецка. Критериями включения в исследование были установленный диагноз коинфекции ВИЧ/ТБ, проведение АРТ и ПТТ согласно Федеральным клиническим рекомендациям, согласие пациентов на участие в исследовании. МЛУ МБТ (резистентность одновременно к изониазиду и рифампицину) обнаружена у 47 пациентов (у 12 больных с МЛУ МБТ имелась дополнительная резистентность к фторхинолонам) с помощью метода абсолютных концентраций на плотных питательных средах и/или выявлением мутации в гене rpoB, ответственной за резистентность к рифампицину (маркер МЛУ) методом GeneXpert MTB/RIF (США) — группа 1. ЛЧ МБТ к препаратам ПТТ первого ряда (изониазид, рифампицин, этамбутол, стрептомицин) и второго ряда (канамицин, офлоксацин, этионамид, протионамид, капреомицин, циклосерин, ПАСК) выявлена стандартным методом абсолютных концентраций на плотной питательной среде Левенштейна–Йенсена у 21 больного — группа 2. У части больных применялось молекулярно-генетическое исследование с применением набора реагентов для выявления ДНК M. tuberculosis complex из диагностического материала и определения лекарственной чувствительности к рифампицину на основании выявления мутации в гене rpoB. В образцах плазмы крови больных определяли концентрацию неспецифических иммуноглобулинов класса А — общего IgА (мг/мл) и секреторного sIgA (мг/л) с использованием стандартных наборов реагентов (ВЕКТОР БЕСТ, Новосибирск) методом твердофазного ИФА. Генотипирование пациентов проводили по генному локусу rs1205 СRPC^3872T с помощью коммерческих наборов реагентов (НПФ «Литех», Москва) методом аллель-специфической полимеразной цепной реакции. Смертельные исходы зарегистрированы на протяжении от 02.02.2018 г. до 21.10.2021 г. Количество умерших пациентов в исследуемой выборке за этот период составило 27 (40 %) человек: в группе 1 умерло 18 (38 %), в группе 2 — 9 (43 %) человек. По результатам аутопсии причиной смерти было прогрессирование ТБ с полиорганным поражением. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с использованием программ Microsoft® Excel® версия 14.4.6 (141106), IBM SPSS Statistics 22. Стандартная обработка включала подсчёт выборки (n — количество обследованных лиц), средних арифметических величин (М), ошибки средней (m). Корреляционную связь анализировали с помощью критерия Спирмена (r). Значимость различий показателей оценивали с помощью критерия Манна-Уитни (р). Определяли соответствие распределения частот генотипов равновесию Харди–Вайнберга по величине χ2 -критерия. Значение р < 0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Смертность от ТБ в исследованной выборке была сравнима в группах 1 и 2 (38 и 43 %, соответственно, р > 0,05), т. е. была существенной не только при МЛУ МБТ, но и при ЛЧ МБТ. Частоты генотипов локуса СRPC^3872T составили: в группе 1 СRPC^3872С — у 26 человек (0,55), СRPC^3872T — у 16 человек (0,34) и СRPT^3872T — у 5 человек (0,11); в группе 2 СRPC^3872С — у 7 человек (0,33), СRPC^3872T — у 12 человек (0,57) и СRPT^3872T — у 2 человек (0,10). Частоты минорного аллеля СRР3872T были равны 0,28 (n = 94) и 0,38 (n = 42) в группах 1 и 2, соответственно (р > 0,05). Распределение частот генотипов не отклонялось от равновесия Харди-Вайнберга (χ2= 1,05 р = 0,31 и χ2 = 0,94 р = 0,33, соответственно, в группах 1 и 2) и не различалось как между группами, так и между умершими и живущими лицами (р > 0,05). Таким образом, варианты генотипов локуса СRPC^3872T не были связаны с исходом лечения коинфекции независимо от чувствительности или резистентности МБТ к ПТТ. В группах 1 и 2, соответственно, концентрация общего IgА составила в среднем 3,31±0,28 мг/мл и 4,35±0,59 мг/мл (р > 0,05), sIgA — 11,36±1,00 мг/л и 15,85±1,72 мг/л (р = 0,017). У умерших и живущих лиц обеих групп содержание общего IgА также не отличалось, составляя в среднем 3,67± 0,24 мг/мл и 3,03±0,44 мг/мл (р > 0,05) в группе 1 и 4,76±0,78 мг/л и 2,89±0,99 (р > 0,05) в группе 2, соответственно. В отличие от общего IgА, в обеих группах содержание sIgA у умерших лиц превышало таковое у живущих: в группе 1, соответственно, 14,02±1,52 мг/л и 9,70±1,25 мг/л (р = 0,019), в группе 2 — 20,15±1,70 мг/л и 12,61±2,36 мг/л (р = 0,018). Концентрация sIgA у умерших в группе 2 в основном превышала таковую в группе 1 (р = 0,007). Выявлена корреляционная связь уровня sIgA с летальным исходом заболевания как в группе 1 (r = 0,345 p = 0,017 n = 47), так и в группе 2 (r = 0,524 p = 0,015 n = 21). Следовательно, sIgA, в отличие от общего IgA, может быть прогностическим биомаркером летальности при клиническом течении ВИЧ/ТБ как при МЛУ МБТ, так и при ЛЧ МБТ. Обнаружена связь уровня sIgA с вариантами полиморфизма СRPC^3872T: носительство генотипа СRPС3872С отрицательно коррелировало с содержанием иммуноглобулина в плазме (r = −0,384 p = 0,008 n = 47), у гетерозигот такая связь положительная (r = 0,301 р = 0,040 n = 47), как и у минорного аллеля СRP3872Т (r = 0,391 p = 0,007 n = 47). Концентрация sIgA у умерших носителей генотипа СRPT3872T в обеих группах суммарно (n = 3) колебалась в диапазоне более высоких значений (от 19,92 мг/л до 24,16 мг/л) в сравнении с живущими носителями генотипа СRPT3872T (n = 4), у которых количество sIgA составляло 4,27 мг/л, 13,36 мг/л, 14,5 мг/л и 29,29 мг/л. К тому же, у умерших носителей генотипа СRPC^3872С в сравнении с живущими носителями СRPC^3872С определялось больше sIgA (15,33±1,99 мг/л; n = 10 против 9,60±1,60 мг/л; n = 23; р = 0,042) и меньше в сравнении с умершими носителями генотипа СRPT3872T (22,04±0,49 мг/л; n = 3; р = 0,049). Таким образом, уровень sIgA, связанный с генотипами локуса СRPC^3872T, является биомаркером, участвующим в патогенезе коинфекции ВИЧ/ТБ не только при МЛУ МБТ, но и при ЛЧ МБТ.

Заключение

Повышенный уровень sIgA у носителей минорного аллеля СRP^3872T при коинфекции ВИЧ/ТБ может быть предиктором летального исхода как при лекарственной резистентности, так и при лекарственной чувствительности инфектанта Mycobacterium tuberculosis к фармпрепаратам ПТТ.